ГОСТ Р ИСО 21148-2011 Изделия косметические. Микробиология. Общие требования к микробиологическому контролю

Обозначение:
ГОСТ Р ИСО 21148-2011 Изделия косметические. Микробиология. Общие требования к микробиологическому контролю
Тип:
ГОСТ
Название:
Дата актуализации текста:
Дата актуализации описания:
71.100.70, 07.100.99
Дата последнего изменения:
Дата завершения срока действия:
gost34453
gost_r_iso_21148-2011.docx PHPWord

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ
СТАНДАРТ
РОССИЙСКОЙ
ФЕДЕРАЦИИ

ИЗДЕЛИЯ КОСМЕТИЧЕСКИЕ
МИКРОБИОЛОГИЯ

Общие требования
к микробиологическому контролю

ISO 21148:2005

Cosmetics Microbiology General instructions for microbiological examination
(IDT)

Издание официальное

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от
27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных
стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0—2004 «Стандартизация в Российской Федерации.
Основные положения»

Сведения о стандарте

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного между-
народного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5 (пункт 3.5)

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом
информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежеме-
сячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра
(замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано
в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответству-
ющая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего
пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и
метрологии в сети Интернет

©Стандартинформ, 2012

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и рас-
пространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническо-
му регулированию и метрологии

Содержание

Приложение А (справочное) Основные методы идентификации 11

Приложение В (справочное) Основные методы подсчета и засева 14

Приложение С (справочное) Приготовление и калибровка инокулятов 15

Библиография 15

Введение

Назначение настоящего стандарта заключается в том, чтобы общие методики, применяемые при
проведении микробиологических исследований в отношении косметических изделий, оставались оди-
наковыми для всех лабораторий, которые признают эти стандарты, что позволит получать однородные
результаты в различных лабораториях и будет способствовать охране здоровья их персонала путем
предотвращения риска инфицирования.

При проведении микробиологических исследований в отношении косметических изделий особен-
но важным является следующее:

Чтобы достичь этого, необходимо уделять особое внимание личной гигиене и использовать рабо-
чие методики, гарантирующие, насколько это возможно, исключение внешнего загрязнения.

При проведении микробиологических исследований является важным знание микробиологичес-
ких методов и исследуемых микроорганизмов. Важно, чтобы испытания проводились, насколько это воз-
можно, точно, включая подсчет числа микроорганизмов.

Значительное количество манипуляций может, например, непреднамеренно привести к пере-
крестному загрязнению, и поэтому лаборанту-микробиологу всегда требуется проверять точность
результатов, полученных с помощью методик, используемых в лаборатории.

Необходимо предпринимать специальные меры предосторожности не только по соображениям
гигиены, но также для обеспечения хорошей воспроизводимости полученных результатов. Невозможно
предусмотреть все меры предосторожности для всех возможных ситуаций, но настоящий стандарт, по
меньшей мере, предусматривает основные правила приготовления, стерилизации и хранения питатель-
ных сред и использование соответствующего оборудования.

Приведенные рекомендации позволят осуществлять подсчет и обнаружение мезофильных микро-
организмов, которые могут произрастать в аэробных условиях. Данные рекомендации распространяют-
ся на определение отсутствия или ограниченной встречаемости заданных микроорганизмов, которые
представляют интерес для косметических изделий.

Методы испытаний приводятся в отдельных стандартах. Также могут использоваться другие аль-
тернативные микробиологические методики при условии, что была продемонстрирована их равнознач-
ность или метод был проверен иначе. Выбор определенного метода или сочетания методов,
упоминаемых в этих международных стандартах, будет зависеть от цели проведения данного испыта-
ния, и пользователю решать, какой именно подход наиболее эффективен для применения.

ИСО 21148:2005 «Косметика. Микробиология. Общие указания по микробиологическому контро-
лю» разработан Техническим комитетом ИСО/ТК217, Косметика.

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ИЗДЕЛИЯ КОСМЕТИЧЕСКИЕ
МИКРОБИОЛОГИЯ

Общие требования к микробиологическому контролю

Cosmetics. Microbiology.
General requirements for microbiological examination

Дата введения — 2013—01—01

Настоящий стандарт приводит общие требования к проведению микробиологических исследова-
ний косметических изделий для обеспечения их качества и безопасности в соответствии с надлежащим
анализом риска (например, низкой активностью воды, водно-спиртовым содержанием, экстремальными
значениями pH).

Из-за исключительно большого разнообразия изделий и их потенциального применения в данной
области эти требования в полном объеме могут оказаться неподходящими для отдельных изделий
(например, ряд не смешивающихся с водой продуктов).

Исходя из назначения данного документа, будут применяться следующие термины и их опреде-
ления:

Площади, требуемые для специальной работы микробиологической лаборатории, отводятся для
следующего:

Издание официальное

Площади, включенные в эту категорию, являются, например, следующими:

* входы, коридоры, лестницы, лифты;

Окружающая среда, в которой проводятся микробиологические испытания, не должна влиять на их
надежность.

Следует выбирать такие помещения, которые исключали бы риск перекрестного загрязнения.

Необходимо соблюдать меры предосторожности с целью защиты от экстремальных условий,
например повышенной температуры, пыли, влажности, пара, шума, вибрации, воздействия прямого
солнечного света ит. д.

Площадь поверхности должна быть достаточно большой, чтобы содержать рабочие места в чисто-
те и в надлежащем порядке.

Во время проведения испытаний доступ к месту их проведения должен быть ограничен только теми
лицами, которые должны проводить эти испытания.

Раздельные помещения, и/или разделенные площади, и/или специально огороженные участки
должны быть предусмотрены для следующего:

В соответствии с нуждами для этой цели рекомендуется фильтрующая вентиляция и/или микро-
биологический бокс.

Нефиксированная лабораторная мебель должна проектироваться таким образом, чтобы облег-
чить чистку полов.

Документы и книги, которыми не часто пользуются, целесообразно хранить вне площадей для про-
ведения испытаний.

Полы, стены, потолок, крышки лабораторных столов и мебель должны поддерживаться вхорошем
рабочем состоянии, исключающем образование трещин, особенно в тех местах, где может скапливаться
грязь, служащая, таким образом, источником заражения.

Регулярная чистка и. где целесообразно, дезинфекция должны проводиться для поддержания
помещения в состоянии, пригодном для проведения испытаний.

Вентиляционные системы и их фильтры должны регулярно проверяться, а фильтры заменяться,
когда это необходимо.

В общем, все оборудование должно содержаться в чистоте и в надлежащем рабочем состоянии.

Операции по техническому обслуживанию должны контролироваться. Измерительные приборы и
аппаратура должны регулярно поверяться согласно соответствующему графику, и результаты регис-
трироваться.

Боксы разделяются на два типа:

Может использоваться любой бокс. Безопасные боксы должны использоваться для всех работ,
связанных с риском для оператора.

Бокс представляет собой не содержащую пыли рабочую станцию, в которой поддерживается вер-
тикальный ламинарный воздушный поток. В микробиологии безопасный бокс используется для хране-
ния микроорганизмов на фильтрах.

Микробиологическая лаборатория для испытания косметических изделий должна быть оснащена
весами нужного диапазона и точности для взвешивания различных изделий. Обычно погрешность, тре-
буемая для взвешивания анализируемых проб и некоторых компонентов культуральных сред и реаген-
тов, составляет ± 0,01 г.

Это оборудование (например, смеситель, качалка и т. д.) может использоваться для приготовле-
ния исходной суспензии из тест-проб нежидких изделий.

pH-метр должен обладать способностью к измерению с погрешностью ± 0,1 ед. pH, и его минималь-
ный порог измерения должен составлять 0,01 ед. pH.

Автоклав должен поддерживаться в исправном рабочем состоянии и регулярно проверяться ком-
петентными службами в соответствии с инструкциями изготовителя, при этом соответствующая доку-
ментация подлежит записи.

Автоклав не должен использоваться одновременно для стерилизации чистых материалов и для
обеззараживания использованных материалов. Где возможно, должны использоваться отдельные
автоклавы для проведения этих процессов.

Термостаты должны быть оснащены системой регулирования, которая позволяет поддерживать
температуры на одном стабильном уровне в течение всего рабочего объема.

Если окружающая температура близка или превышает температуру термостата, используют тер-
мостат с системой охлаждения.

Термостаты должны быть защищены от воздействия прямого солнечного света.

Термостаты не целесообразно полностью заполнять за одну отдельную операцию, так как для
культуральных сред необходим продолжительный период времени для достижения температурного
равновесного состояния, не зависимо от типа термостата (конвекция принудительного охлаждения или
какой-либо другой принцип).

Температура должна проверяться и регистрироваться не реже одного раза 8 течение каждого
рабочего дня.

Водяные бани делятся на два типа:

* термостатически-регулируемые бани, пригодные для инкубации инокулированных культураль-
ных сред, для идентификационных испытаний и т. д.;

Требуемая температура и точность оговариваются в каждом методе применения.

Температура, если не оговорено иное, должна составлять (5 ± 3) ФС.

Температура, если не оговорено иное, должна быть ниже минус 18 °C.

Суховоздушный стерилизатор представляет собой камеру, которая позволяет разрушать микро-
организмы посредством сухого жара. В камере температура должна распределяться равномерно.

Суховоздушный стерилизатор должен быть оснащен:

Может использоваться устройство для подсчета колоний.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Мерная стеклянная посуда не должна стерилизоваться в суховоздуш-
ном стерилизаторе.

Прочее оборудование и аппаратура повседневного использования включают следующие:

д) оптический микроскоп;

Если используется метод мембранной фильтрации, оборудование также должно включать:

Штаммы, необходимые для подтверждения методологии, указаны в каждом методе применения.

Весь персонал, занятый в микробиологической лаборатории, должен получить соответствующую
подготовку, которая помогла бы ему надлежащим образом осуществлять порученную работу.

Персонал, который проводит испытания, должен обладать хорошими знаниями и достаточным
практическим опытом в сфере микробиологической методологии и исследуемых микроорганизмов.
Ответственные лица должны уметь интерпретировать вопросы точности и прецизионности, требуемые
для получения приемлемых результатов.

В области личной гигиены нижеследующие меры предосторожности должны соблюдаться не толь-
ко для того, чтобы избежать загрязнения проб и культуральных сред, но также для того, чтобы исключить
риск хронической инфекции:

• поддерживают ногти в идеальной чистоте; они должны быть хорошо обработаны и желательно
короткие;

Аппаратуру и стеклянную посуду, используемые в микробиологии, следует подготавливать таким
образом, чтобы гарантировать их чистоту и/или стерильность до времени использования.

Перед стерилизацией закрывают пробками пробирки и колпачками бутыли из соответствующего
материала.

Закрывают пипетки ватой или любым другим соответствующим материалом.

Если необходимо, подлежащую стерилизации аппаратуру и стеклянную посуду помещают в специ-
альные контейнеры или обертывают соответствующим материалом (например, специальной бумагой,
алюминиевой фольгой и т. д.).

Нагревают в суховоздушном стерилизаторе не менее 1 чпри температуре от 170 °C до 180 °C или
используют любые параметры времени и температуры, если их правильность будет подтверждена.

Индикаторы могут использоваться для того, чтобы убедиться, что стерилизация достигнута.

Нагревают не менее 15 мин при минимальной температуре 121 °C в автоклаве. Индикаторы могут
использоваться для того, чтобы убедиться, что стерилизация достигнута.

Одноразовая аппаратура может использоваться таким же образом, что и стеклянная посуда
повторного применения (чашки Петри, пипетки, пробирки и т. д.), если технические условия являются
подобными.

В этом случае следует обращаться к изготовителю с целью определения пригодности предлагае-
мой аппаратуры и стеклянной посуды в микробиологии (в особенности, в отношении стерильности) и
отсутствия в материале веществ, которые тормозят рост микроорганизмов.

Одноразовая аппаратура должна обеззараживаться перед и после использования. Помимо мето-
дов, описанных 8 7.6, может применяться прокаливание. Если в помещении имеется печь для прокали-
вания , обеззараживание и удаление можно осуществлять за одну операцию.

Чистую аппаратуру и стеклянную посуду необходимо защищать от внешнего загрязнения во время
хранения при условиях, которые обеспечивают их чистоту.

Перед использованием аппаратуру и стеклянную посуду необходимо хранить при условиях, кото-
рые обеспечивают их стерильность. Одноразовую аппаратуру и стеклянную посуду необходимо хранить
8 соответствии с техническими условиями изготовителя, исключая любое повреждение упаковки; подго-
товленная в лаборатории аппаратура и стеклянная посуда должны храниться в чистых контейнерах.

При стерилизации аппаратуры и стеклянной посуды, предназначенной для микробиологии, срок
годности или дата изготовления должны быть приведены на каждой упаковке. Герметичную аппаратуру
и стеклянную посуду можно хранить не более 3 мес перед использованием, если не оговорено иное.

После использования культура микроорганизмов или материал, контактирующий с микроорганиз-
мами, аппаратура, стеклянная посуда и их содержимое должны обрабатываться на предмет уничтоже-
ния микроорганизмов перед чисткой или удалением, какой бы микроорганизм не рассматривался.

В зависимости от характера материалов может использоваться дезинфекция (10.1), стерилизация
(7.2) или прокаливание (7.3).

Промывают аппаратуру и стеклянную посуду после их обработки (7.6).

Опорожняют контейнеры от их содержимого.

Перед промыванием отделяют уплотнения от пробок или колпачков соответствующим образом.

Смывают осадок детергента из оборудования водопроводной водой. Промывают оборудование
водой согласно 8.2.

В отсутствие какого-либо торгового изделия раствор карбоната натрия 0,125 % (массовая доля)
может использоваться с последующим погружением в разбавленную кислоту [например, соляную кисло-
ту молярной концентрацией с(НС!) = 0,1 моль/дм3] по [6].

Специализированная аппаратура и стеклянная посуда могут использоваться с целью облегчения
операций чистки (например, пипеточные лромыватели, посудомоечные машины, ультразвуковые ванны
ит. д.).

Точное приготовление культуральных сред — одна из фундаментальных стадий в микробиологи-
ческом анализе, и ей должно быть уделено особое внимание.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Вода, пропущенная через ионообменник (деионизированная), может
иметь высокое содержание микроорганизмов; следовательно, целесообразно не использовать
такую воду, не убедившись втом, что содержание микроорганизмов в ней является низким. Обра-
щаются к изготовителю по поводу наиболее эффективного способа минимизации микробного
загрязнения. Сильно загрязненная, деионизированная вода, которая подверглась стерилизаци-
онному фильтрованию, может все еще содержать вещества, тормозящие рост некоторых микро-
организмов.

Используют дистиллированную воду эквивалентного качества, т. е. очищенную [2], [9] и [11] или
деионизированную [8]. Если дистиллированную воду приготавливают из хлорированной воды, нейтра-
лизуют хлор перед дистилляцией.

Вода должна храниться в контейнерах, изготовленных из инертных материалов (например, ней-
тральное стекло, полиэтилен и т. д.).

Существуют два типа приготовления культуральных сред:

- из основных ингредиентов, дегидратированных или нет, или

• из полностью сухих сред.

Следуют заданным изготовителем условиям хранения и сроку годности.

Не допускается использование культуральных сред с просроченным сроком годности (хранения).

Предохраняют лабораторные культуральные среды, которые находятся в сухом виде, от поглоще-
ния дополнительной влаги из окружающей среды во время хранения и использования.

Следуют рекомендации изготовителя в отношении повторной гидратации.

Измеряют pH с помощью рН-метра (4.5) и калибруют его, если необходимо, таким образом, чтобы
после стерилизации и охлаждения до комнатной температуры данная среда имела бы заданный
pH ± 0,2 ед. pH, если не оговорено иное.

Примечание — Калибровку обычно проводят, используя раствор, состоящий из приблизительно
40 г/дм3 (около 1 моль/дм3) гидроокиси натрия (ЫаОН) или из приблизительно 36,5 г/дм3 (около 1 моль/дм3) хлорис-
товодородной кислоты (HCI). [6].

Дозируют среду в соответствующие емкости вручную или с помощью автоматических приборов.

Стерилизацию культуральных сред и реагентов следует проводить, используя различные методи-
ки, включая следующие:

В зависимости от используемого метода после стерилизации среды она должна контролировать-
ся, в особенности в отношении pH, окрашенности, стерильности и микробиологических характеристик.

Используют автоклав (4.6) для стерилизации. В общем, стадия стерилизации занимает 15 мин и
более при температуре 121 °C. Адаптируют цикл стерилизации, если необходимо, на заданный объем и
количество емкостей, характер загрузки и тип сред.

Характеристики стерилизации должны контролироваться посредством соответствующих средств.

Стерилизация посредством фильтрации может быть проведена в вакууме или в условиях высокого
давления.

Используют стерильные мембраны и фильтровальные элементы с размером диаметра пор
0,22 мкм (за исключением отдельных случаев, где может допускаться значение 0,45 мкм). Обращаются к
инструкциям изготовителя в отношении использования фильтровальных элементов или мембран, кото-
рые были приобретены в стерильном состоянии.

Стерилизуют различные компоненты фильтровального устройства, собранного или нет, в автокла-
ве в течение 15 мин при температуре 121 вС. Если необходимо, может быть проведена асептическая
сборка в микробиологическом боксе после обработки в автоклаве. Некоторые устройства могут приоб-
ретаться в стерильном состоянии.

Каждая упаковка бутылей, пробирок и чашек Петри должна маркироваться и иметь следующую
информацию:

Культуральные среды, дозированные в пробирках или бутылях, и реагенты, которые не подлежат
немедленному использованию, должны быть защищены от света и высыхания посредством соответ-
ствующих инертных пробок или завинчивающихся колпачков, имеющих инертные прокладки.

Они должны содержаться в условиях, которые препятствуют изменению их химического состава.

Не допускается использовать высохшие среды, которые были регидратированы.

Перед использованием целесообразно, чтобы температура культуральных сред находилась в
равновесном состоянии с температурой лаборатории, если не оговорено иное.

Например, TSA среда, приготовленная в лаборатории, должна содержаться в колбах и храниться в
темноте, обычно не более двух месяцев, если не оговорено иное.

Необходимо соблюдать условия инструкций изготовителя в отношении следующего:

Плавят культуральную среду путем помещения ее в баню с кипящей водой или с помощью любого
другого процесса, который дает идентичный результат (например, паровой проточный автоклав).

Избегают перегрева и удаляют культуральную среду, кактолько она расплавилась. Выдерживают
данную культуральную среду 8 расплавленном состоянии в водяной бане при температуре не выше чем
48 °C до тех пор, пока не наступит время ее использования. Никогда не используют культуральную среду
при температуре выше 48 °C. Предпочтительно не выдерживать расплавленную среду более 8 ч. В слу-
чае особо чувствительных культуральных сред продолжительность плавления может быть сокращена.

Не допускается повторное плавление неиспользованной затвердевшей среды для последующего
использования.

Заполняют расплавленной агаровой культуральной средой чашки Петри таким образом, чтобы
получить толщину не менее 3—4 мм (например, для чашек с размером диаметра 90 мм обычно требует-
ся от 15до20см3 агаровой среды).

Дают агаровой среде остыть и затвердеть помещением чашек Петри на холодную горизонтальную
поверхность.

Приготовленные подобным образом чашки Петри сразу же используют или хранят их (в темноте и
при соответствующей температуре и продолжительности) в условиях, которые исключают изменение
химического состава. Маркируют чашки в соответствии с 8.5.

Перед использованием необходимо провести высушивание.

Готовые к использованию чашки с агаровой средой хранят и используют в соответствии с инструк-
циями изготовителя.

Термины и их определения «изделие» и «проба» приведены в 2.1 и 2.2 соответственно.

Важно, чтобы лаборатория получила изделие, которое полностью идентифицирует косметические
изделия соответствующей партии. Изделие не должно быть повреждено при транспортировании или
хранении.

Отбор проб должен проводиться в соответствии с определенными и соответствующими докумен-
тами. Если требуемый документ отсутствует, рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны пришли
к соглашению по данному вопросу.

Во время транспортирования изделия, подлежащие исследованию, должны находиться в услови-
ях, которые сводят к минимуму изменения микробного содержания.

Персонал лаборатории должен проверить состояние изделий при приемке и подтвердить, что их
состояние и количество являются удовлетворительными. Если их состояние неудовлетворительное
или количество недостаточное, лаборатория не сможет провести заданное испытание.

Однако в особых обстоятельствах, если испытание завершено, персонал должен зарегистриро-
вать состояние изделия и причину его тестирования.

Изделия, допущенные в лабораторию, должны документироваться таким образом, чтобы процесс
их нахождения прослеживался вплоть до момента составления протокола испытания.

Следующая информация должна быть указана:

• характеристики операции отбора проб (дата отбора проб, условия отбора проб и т. д.);

Если необходимо, изделия, подлежащие тестированию, хранят при комнатной температуре. Изде-
лия (2.1) и пробы (2.2) до или после испытания не инкубируют, не охлаждают или не замораживают.

Для устранения загрязнения окружающей среды, продукции и проб обращаются с ними таким обра-
зом, чтобы исключить какой бы то ни было риск загрязнения.

Для достижения результата:

За исключением специальных случаев хранят изделия до тех пор, пока не будут получены все нуж-
ные результаты, или более продолжительный период, если необходимо.

Отбраковывают изделия, из которых отбирались пробы, исключая случаи, когда характер и уро-
вень загрязнения заставляет рассматривать их как загрязненный материал (7.6).

Меры предосторожности должны быть приняты для проведения работы (насколько это возможно)
в асептических условиях, например следующие:

д) если общее количество разовых пипеток, чашек Петри и т. д. в упаковке не используют во время
исследования, убеждаются в том, что данная упаковка закрыта надлежащим образом после отбора
соответствующего количества единиц продукции;

Манипулирование с изделиями и последующими культурами, которые, возможно, содержат пато-
генные бактерии, требует введения специальных мер предосторожности. Рекомендуются следующие:

Примечание — Капли — основная причина загрязнения окружающей среды и инфекции. Капли могут
образовываться, например:

при опорожнении пипеток путем продувания;

Следовательно, необходимо минимизировать их образование.

В случае приготовления исходной суспензии и пробных разбавлений время, которое прошло меж*
ду окончанием приготовления и моментом вступления инокулята в контакт с культуральной средой, не
должно превышать 45 мин, если в соответствующих документах не оговорено иное.

Исходную суспензию приготавливают из пробы не менее 1 г или 1 см3хорошо смешанного испытуе-
мого изделия.

Приготовление, калибровка инокулята — по приложению С.

Регистрируют точную массу или объем пробы S.

Переносят пробу (S) изделия в любую подходящую емкость и проводят точное и соответствующее
разбавление в соответствии с установленным стандартом.

Регистрируют коэффициент разбавления d.

Переносят пробу (S) изделия в любую подходящую емкость, содержащую соответствующее коли-
чество солюбизирующего агента (например, полисорбата 80) и проводят точное и соответствующее
разбавление в соответствии с установленным стандартом.

Регистрируют коэффициент разбавления d.

Следуют стандартному методу применения. Относительно информации см. приложение В.

Следуют стандартному методу применения.

Основные методы идентификации изложены в приложении А.

Следуют стандартному методу применения.

Перед обнаружением жизнеспособных микроорганизмов в косметическом изделии возможное
торможение микробного роста со стороны пробы должно быть нейтрализовано. Во всех случаях и неза-
висимо от методологии нейтрализация антимикробных свойств изделия должна быть подтверждена.

Следуют стандартному методу применения.

Приложение А
(справочное)

Основные методы идентификации

А.1 Приготовление чистой культуры

А.1.1 Общее требование

Приготовление чистой культуры начинают с селекции колонии на или в агаровой среде, которая была иноку-
лирована разбавлением тест-пробы или культурой.

Затем выбранную колонию инокулируют на неселективной агаровой культуральной среде. После инкубации
выбирают хорошо изолированную колонию. Повторяют операцию, если это необходимо.

Используют методы чашечного высевания, описанные в А. 1.2. Различные методы могут оказаться необходи-
мыми в специальных случаях.

А.1.2 Чашечное высевание

А.1.2.1 Общие требования

Отбираютнебольшое количествосповерхности хорошо изолированной колонии кончиком стерильной петли.

Затем высевают либо непосредственно с клетками, присутствующими на петле (А. 1.2.2), либо приготавлива-
ют суспензию из этих клеток (А.1.2.3).

А.1.2.2 Прямой метод: Пример

Кончиком петли инокулируют (близко расположенными штрихами) часть, приблизительно в одну треть пло-
щади, поверхности агаровой среды. Стерилизуют и охлаждают петлю. С края инокулированной площади получают
другой ряд штрихов, менее плотно расположенных, чем в первый раз. на одной половике оставшейся еще не иноку-
лированной площади поверхности. Повторяют операцию на оставшейся площади поверхности, располагая штрихи

 

Рисунок А.1 — Пример чашечного посева: прямой метод

А.1.2.3 Метод с использованием разбавления

Суспендируют клетки в селективном разбавлении объемом 1—2 см3, проводя инокулированной петлей по
стенке пробирки у поверхности жидкости, затем хорошо перемешивают.

Стерилизуют и охлаждают петлю. С помощью петли отбирают небольшое количество микробной суспензии и
продолжают согласно А.1.2.2.

А.1.3 Инкубация

Переворачивают инокулированные чашки Петри и помещают их 8 термостат на заданный период времени
при заданной температуре.

А.1.4 Селекция

После инкубации выбирают хорошо изолированную колонию из чашки либо для последующего высевания,
либо для проводимых испытаний.

Если возможно, то окончательные испытания следует проводить, используя клетки, выращенные из одной
единственной колонии. В случае недостаточного клеточного материала в одной колонии сначала необходимо осу-
ществить субкультивирование в жидкой среде или на скошенной агаровой среде, после чего субкультуру можно
использовать для проведения испытаний.

А.2 Окраска по Граму (модифицированный метод Хакера)

А.2.1 Общие требования

Данное окрашивание бактериальных клеток допускает описание морфологии бактерий и их классификацию
на две группы в зависимости от того, способны они удерживать фиолетовую окраскукристаллического фиолетового
красителя 8 условиях испытаний или нет. Подобное деление обусловлено, главным образом, различиями в структу-
ре клеточных стенок двух групп и коррелируется с другими существенными различиями между этими двумя группа-
ми. Существует ряд способов рассмотрения окраски по Граму, однако все они следуют последовательностям,
приводимым ниже.

А.2.2 Растворы

А.2.2.1 Общие требования

Могут использоваться технически чистые растворы. В этом случае следуют рекомендациям изготовителя.

А.2.2.2 Раствор кристаллический фиолетовый

Растворяют фиолетовый кристаллический в этиловом спирте и оксалат аммония — в дистиллированной
воде. Смешивают два раствора и дают отстояться смеси в течение 24 ч перед применением.

А.2.2.3 Раствор йода

А.2.2.3.1 Химический состав

Йод —1.0 г;

Йодид калия (KI) —2,0 г;

Вода —100 см3.

А.2.2.3.2 Приготовление

Йодид калия растворяют в 10 см3 дистиллированной воды, добавляют частями йод. После растворения дово-
дят обьем раствора в мерной колбе до 100 см3.

А.2.2.4 Раствор сафранина

А.2.2.4.1 Химический состав

Сафранин О —0,25 г;

Этиловый спирт (95 %) —10 см3;

Вода —100 см3.

А.2.2.4.2 Приготовление

Растворяют сафранин в этиловом спирте, затем смешивают с дистиллированной водой. Доводят объем
раствора до 100 см3.

При использовании раствора фиолетового кристаллического проверяют стабильность раствора. Для про-
верки смешивают одну каплю раствора кристаллического фиолетового с одной каплей раствора йода на предмет-
ном стекле, чтобы проследить за химической реакцией. Если на стекле видна кристаллизация, раствор
фиолетового кристаллического не используют.

А.2.2.5 Методокрашивания

После фиксации на предметном стекле (например, пламенем) бактериального мазка, приготовленного из
18—24-часовой культуры или из помутневшего бульона, покрывают мазок раствором кристаллического фиолето-
вого (А.2.2.2). Даюг реагировать в течение 1 мин.

Осторожно промывают наклоненное предметное стекло водой в течение нескольких секунд.

Покрывают предметное стекло раствором йода (А.2.2.3). Дают ему реагировать в течение 1 мин. Затем осто-
рожно промывают наклоненное предметное стекло водой в течение нескольких секунд.

Наносят осторожно и непрерывно пленку этилового спирта (95 %) на наклонное предметное стекло не более
чем 30 с и до тех пор. пока не перестанет выступать фиолетовый цвет.

Наклоненное предметное стекло осторожно промывают водой в течение нескольких секунд.

Предметное стекло покрывают раствором сафранина (А.2.2.4) в течение 10 с.

Осторожно промывают наклоненное предметное стекло водой.

Предметное стекло высушивают.

А.2.2.6 Интерпретация

Исследуют предметное стекло под обьективом микроскопа с большим увеличением (4.13). Те бактериаль-
ные клетки, которые окрасились в синий или фиолетовый цвет, относят к числу грамположительных. окрашенные в
темно-розовый и красный — к грамотрицательным.

В отношении чистой культуры некоторых бактериальных типов как грамположительные, так и грамотрица-
тельные клетки могут быть получены в одном и том же поле зрения микроскопа.

Примечание — У плотноупакованных клеток может отмечаться нехарактерная реакция.

А.З Тестна каталазу

А.3.1 Общие требование

Обнаружение этого фермента, который разлагает перекись водорода (Н2О2) на воду и кислород, может быть
проведено с помощью бульонной культуры, агаровой культуры или одной единственной колонии на агаровой среде.

А.3.2 Из бульонной культуры

Добавляют в 1 см3 культуры 0.5 см310-объемного (3 % (массовая доля)] раствора перекиси водорода. Отме-
чают возникновение пузырьков кислорода (каталазоположительных) или их отсутствие (каталазоотрицательных).

А.3.3 Из агаровой культуральной среды

Покрывают культуру 1—2 см310-объемного [3 % (массовая доля)) раствора перекиси водорода.

Наблюдают сразу же и по истечении 5 мин независимо от того, сформировались ли пузырьки кислорода
или нет.

А.3.4 Из колонии

вводят раздельно две капли 10-объемного раствора перекиси водорода на предметное стекло микроскопа.

Отбирают колониюс помощьюстерильной стеклянной или пластиковой палочки (но только не металлической
иглы) и осторожно эмульгируют ее в одну из этих двух капель. Наблюдают сразу же и через несколько минут (не
менее 1 мин), сформировались или нет пузырьки кислорода. В случае сомнения покрывают каждую каплю покров-
ным стеклом и сравнивают возникновение пузырьков под обоими покровными стеклами.

Наблюдение можно проводить макроскопически или используя микроскоп с малым увеличением.

А.4 Тестнаоксидазу

А.4.1 Общее требование

Обнаружение оксидазы выявляют путем изменения цвета соединения во время окисления под действием
данного фермента.

А.4.2 Реагент

А.4.2.1 Химический состав

Л/.А/.Л/'.А/’-тетраметил-З-р-фенилендиаминдигидрохлорид (C10HieN2 2HCI) 1,0 г.

вода 100 см3.

А.4.2.2 Приготовление

Растворяют реагент вхолодной воде. Приготавливают реагент непосредственно перед его использованием.

Могут использоваться технически чистые диски или палочки. В этом случае следуют рекомендациям изгото-
вителя.

А.4.2.3 Метод

Увлажняют фильтровальную бумагу реагентом. Берут пробу бактериальной культуры, полученной из агаро-
вой среды, с помощью платиновой иглы или стеклянной или пластиковой палочки (никельхромовая игла дает лож-
ный положительный результат) и наносят ее на смоченную фильтровальную бумагу.

А.4.2.4 Интерпретация полученного результата

8 случае присутствия оксидазы появляется фиолетово-пурпурный цвете течение 5—10 с. Если цветне изме-
нился в течение Юс. тест рассматривается как отрицательный.

А.5 Использование биохимических тестов на идентификацию микроорганизмов

Для идентификации могут использоваться существующие в настоящее время биохимические тесты. Вместе
с тем, все коммерческие тесты не обеспечивают одинаковый уровень надежности. Следовательно, их рабочие
характеристики должны оцениваться перед использованием, если только они не были подтверждены изготовите-
лем и/или независимой организацией.

Приложение В

(справочное)

Основные методы подсчета и засева

В.1 Инокуляция для разлитых планшетов

Приготавливают среду, чашки Петри, разбавители и разбавления, подлежащие исследованию, в коли-
чествах с параметрами, соответствующими плану инокуляции.

Вводят определенные объемы разбавлений, подлежащих исследованию, в чашки Петри (маркированные).
Вливают определенный объем среды, оговоренный в 8.7, в каждую чашку. Сразу же осторожно смешивают рас-
плавленную среду и инокулят таким образом, чтобы получить однородное распределение микроорганизмов в мас-
се среды. Дают остыть и затвердеть, помещая чашки Петри на горизонтальную холодную поверхность (время
затвердевания агара не должно превышать 10 мин).

В.2 Поверхностная инокуляция

Помещают инокулят в центр маркированной чашки Петри на агаровую культуральную среду (приготовленную
в соответствии с 8.7). Распределяют ее равномерно и как можно скорее по поверхности среды, используя стериль-
ный стеклянный или пластиковый шпатель, или вращают чашку до тех пор, пока нельзя будет заметить какого-либо
количества жидкости на поверхности агара.

В.З Мембранная фильтрация

Переносят соответствующее количество пробы, приготовленной и рассматриваемой как действительную, в
фильтрационное устройство, смоченное небольшим объемом соответствующего стерильного разбавителя, сразу
же фильтруют и промывают согласно установленной процедуре.

Переносят мембранный фильтр в чашку Петри на поверхность агаровой среды.

Приложение С

(справочное)

Приготовление и калибровка инокулятов

С.1 Культура эталонных штаммов

Чтобы улучшить повторяемость и воспроизводимость результатов, рекомендуется использовать третью (по
крайней мере, вторую) субкультуру, выращенную на агаровой среде, полученной от культур, хранимых и приготов-
ленных согласно [4]. При использовании Е. coli, Р. aeruginosa, S. aureus субкультуры активируют в течение интерва-
лов времени от 18 до 24 ч. При использовании С. albicans пригодна первая субкультура или вторая субкультура,
выращенная в течение от 36 до 48 ч.

С.2 Приготовление клеточных суспензий

Берут 10 см3 разбавителя и вводят в 100 см3 стерильную колбу, содержащую 5 г стеклянных микрошариков.
Переносят полные петли клеток, выращенных на агаровой среде, в разбавитель. Клетки должны быть суспендиро-
ваны в разбавителе путем погружения петли в разбавитель и трения ее о стенку колбы с целью смешивания клеток.
Встряхивают колбу 2—3 мин (используя, если возможно, механическую мешалку). Отбирают пипеткой верхнюю
часть суспензии (избегая любого контакта со стеклянными микрошариками) и переносят полученную суспензию в
стерильную емкость.

С.З Калибровка суспензий

Регулируют число клеток в суспензии до значений 1 х108 КОЕ/см33x10® КОЕ/см3 (с С. albicans от
1 х 107 КОЕ/см3 до 3 х 107 КОЕ/см3), используя разбавитель, и в соответствии с данными калибровки, полученными
в лаборатории. Например, используют спектрофотометр [длиной волны (620120) нм] и одноразовую кювету толщи-
ной 10 мм. Измеряют спектральную поглощательную способность аликвоты и, если необходимо, разбавляют рас-
твор, чтобы довести эту способность суспензии до определенного значения. Соответствующие значения
оптической плотности суспензии были получены между 0,150 и 0,460, в зависимости от штаммов.

Библиография

УДК 665.58:006.354 ОКС 71.100.70 Р19 ОКСТУ9150

Ключевые слова: косметические изделия, микробиологический контроль, культуральные среды, поме-
щения, оборудование, лабораторные пробы, интерпретация полученных результатов

Редактор М.Е. Никулина
Технический редактор В.Н. Прусакова
Корректор 6.Е. Нестерова
Компьютерная верстка И.А. Налейкиной

Сдано в набор 05.09.2012. Подписано 8 печать 25.09.2012. Формат 60 х 84 Гарнитура Ариал

Усл. печ. л. 2.32. Уч.-изд. л. 2,05. Тираж 111 экз. Зак. 830.

Впервые эта аббревиатура появилась во времена СССР, и расшифровывается она как Государственный Стандарт. Со временем количество госстандартов увеличилось, и за их несоблюдение нарушителям грозила уголовная ответственность. Сегодня наблюдается тенденция к сокращению национальных стандартов.

ГОСТ - это государственный стандарт, свод сформулированных требований, предъявляемых государством к качеству и безопасности продукции, работ и услуг межотраслевого значения. Стандарты, подтверждающие, что они прошли проверку и отвечают всем требованиям безопасности, устанавливаются с учетом современных достижений науки, технологий и опыта.

Зачем нужен ГОСТ

ГОСТы призваны регламентировать, какие качества должны быть у продукции, вырабатываемой и продаваемой на территории конкретной страны. В наше время есть госстандарты, касающиеся любой отрасли промышленности и других сфер нашей жизни. Их задача – установить правила по изготовлению:

  • инструментов
  • продуктов питания
  • одежды и обуви
  • транспорта и всего того, без чего жизнь человека невозможна

В госстандартах указываются продукты, которые можно использовать, возможные методы производства, оборудование, на котором будет производиться изделие, технологии, по которым все это должно производиться, и т.д. Госстандарты, принятые в Российской Федерации, в своем названии, кроме аббревиатуры ГОСТ, имеют букву «Р». Это правила сертификации, на основании которых осуществляются самые разные процедуры, включая экспертизу, процессы и разные способы.

Обязательно ли соблюдать нормативы документа

Их соблюдение было обязательным до 1 сентября 2011 г. В то время считалось, что это поможет держать под контролем качество производимых товаров, а значит защищать здоровье и жизнь населения, животных, растений и пр. Однако с этого дня соблюдение ГОСТов не обязательно, оно носит добровольный характер.

Каждый может сам выбирать и покупать товары, по ГОСТу ли они выработаны или без них. И производитель может решить – изготавливать товар по ГОСТу или по ТУ. Но при этом придется учесть, что многие ГОСТы создавались в эпоху натуральной, а не модифицированной продукции. Но речь не о производственных и других сферах, напрямую касающихся жизни и здоровья людей, использовании стандартов для оборонной продукции или защиты данных, которые составляют государственную тайну или другой информации ограниченного доступа В РФ ГОСТы принимает Госстандарт России. В сфере строительства и промышленности, строительных материалов - Госстрой. Но современный мир пытается перейти на технические регламенты.

Отличие ГОСТ от других стандартов

  • ОСТ. Этот стандарт, который устанавливает требования к качеству продукта в конкретной сфере, разрабатывается там, где нет ГОСТов, или их требования нужно уточнять
  • ТУ. В ходе перехода экономики к рыночным отношениям в обиход вошли технические условия - ТУ. Их цель заключается в регламентировании производство продукции, не попадавшей под действие ГОСТа. Требования ТУ, создаваемых предпринимателями-производителями, не должны противоречить обязательным требованиям ГОСТов
  • Технический регламент. Он устанавливает обязательные условия хранения продукции, ее перевозки и продаж. Главное отличие ГОСТа от ТР заключается в том, что госстандарт характеризуется количественными параметрами выпускаемых изделий, а ТР – условиями применения готовой продукции

Похожие госты